Dimension Vista® - Principios de Fotometría/Turbidimetría - Curso online

Seleccione Siguiente para continuar. Definir las tecnologías de los ensayos fotométricos y turbidimétricos realizados en el sistema Dimension Vista® Describir cómo el fotómetro mide la absorbancia de la luz. Identificar los componentes del sistema Dimension Vista® que intervienen en los ensayos fotométricos. Bienvenido al curso de capacitación en línea "Fotometría" del sistema Dimension Vista®. Después de completar este módulo, usted podrá: Felicidades. Usted ha completado el curso de capacitación y soporte en línea fotometría. En este módulo, le hemos presentado el área de medición de ensayos del sistema Dimension Vista®, donde se realizan las pruebas que emplean tecnologías de fotometría y turbidimetría. A continuación se resumen los puntos principales de este curso. Describir cómo un fotómetro mide la absorbancia de luz La fuente de alimentación de la lámpara de destello: suministra alimentación de alto voltaje para activar la mezcla de gas xenón contenida en la lámpara de destello. Lámpara de destello del xenón: Proporciona la fuente de luz para el fotómetro. Cada vez que el rotor de cubetas gira, la lámpara de destello emite un haz de luz que ilumina los doce canales simultáneamente. Haz de fibra óptica: incorpora 12 canales que dirigen la luz hacia un detector determinado. Diez de estos canales se utilizan para mediciones fotométricas y, los dos restantes, para mediciones turbidimétricas. Fotómetro: contiene: los filtros de longitud de onda, lentes, un divisor de haz y detectores para medir las lecturas de intensidad de luz para cada canal óptico. Definir tecnologías de los ensayos fotométricos y turbidimétricos realizadas por el Sistema Dimension Vista ® Ensayos colorimétricos: El reactivo reacciona con el analito para producir un color. El fotómetro mide la cantidad de luz absorbida a una longitud de onda específica por la solución coloreada La cantidad de luz absorbida es directamente proporcional a la concentración de analito en la muestra. Ejemplos: GLU, CA, BUN, y otros ensayos de rutina incluyen los perfiles de química clínica. Ensayos ACMIA: El analito presente en la muestra se incuba con anticuerpo monovalente (específico del analito que se desea determinar) marcado con enzima y presente en la muestra en una cantidad en exceso a fin de garantizar que todo el analito se une al anticuerpo. El exceso de anticuerpo monovalente se retira y la mezcla se separa magnéticamente. El sobrenadante que contiene el complejo analito-anticuerpo-enzima se mezcla con un sustrato y se mide a continuación con una técnica cinética bicromática (405 y 510 nm). La parte enzimática del complejo anticuerpo-enzima cataliza la hidrólisis del sustrato provocando de este modo una variación de la absorbancia a 577 nm. Esta variación de la absorbancia a 577 nm es directamente proporcional a la actividad enzimática y se mide mediante una técnica de cinética bicromática (577 y 700 nm). Ejemplos: digoxina (DIG), digitoxina (DGTX), ciclosporina (CSA) y triyodotironina (T3). Ensayos de EMIT ® (Enzyme-Multiplied Immunoassay Technique): Basados en la competencia entre el analito presente en la muestra y el analito presente en el reactivo que está marcado con la enzima glucosa-6-fosfato-deshidrogenasa (G6P-DH). La cantidad de enzima libre convierte NAD oxidado a NADH, que forma un color. La intensidad de este cambio de color es proporcional a la concentración de analito en la muestra y se mide fotométricamente a 340 nm. Ejemplos: drogas de abuso, como los barbitúricos y etanol. Ensayos PETINIA (turbidimétrico inhibición de inmunoensayo de partículas-Mejorado): Basados en la competencia entre el analito presente en la muestra y el analito presente en el reactivo unido a partículas sintéticas por los sitios de unión del anticuerpo monoclonal específico de ese analito incluido también en el reactivo, lo que reduce la tasa de agregación. La velocidad de agregación es inversamente proporcional a la concentración del analito en la muestra y se mide con una técnica de cinética turbidimétrica a 340 y 700 nm. Ejemplos: seguimiento de fármacos terapéuticos como la teofilina (THEO) y la tobramicina (TOBR). Identificar las funciones de los componentes del sistema Dimension Vista® utilizados durante las pruebas fotométricas El fotómetro es el sistema de detección para los ensayos colorimétricos y turbidimétricos que mide y registra las lecturas de absorbancia leídas. El fotómetro se encuentra en el área medición de los ensayo del sistema Dimension Vista®. Dispensación del reactivo: una cánula de reactivos aspira reactivo de un cartucho de reactivo Flex® y lo dispensa en una cubeta. Dispensación de la muestra: el rotor de cubetas gira para colocar la cubeta en una posición cercana a la bandeja de alícuotas. La cánula de muetra 1 dispensa muestra desde un pocillo de la bandeja de alícuotas en la cubeta, donde la muestra se mezcla con el reactivo. La incubación de la cubeta: El reactivo y la muestra contenidos en la cubeta se incuban para que pueda producirse la reacción química. Medición de la intensidad de luz: Una vez finalizado el periodo de incubación, el rotor de cubetas gira una vez más para desplazar la cubeta hasta la posición del fotómetro. Una vez que el centro de las cubetas está alineado con el centro de cada canal de una longitud de onda específica, el sistema envía una señal al fotómetro, que activa la lámpara de xenón que, a continuación, ilumina con un destello los doce canales simultáneamente. Las superficies transparentes y paralelas de las cubetas ofrecen una trayectoria limpia para que el haz de luz transmita la luz a través de la solución. Asimismo, el rotor de cubetas está colocado en el instrumento de tal modo que cada cubeta se alinea con la trayectoria de la señal de cada detector. El rotor de cubetas gira continuamente. En cada giro, el fotómetro registra una lectura por cubeta para cada longitud de onda medida. Las longitudes de onda específicas medidas y el número de mediciones registradas varían en función del método empleado. Reutilización de cubetas: una vez que la prueba fotométrica ha concluido, el rotor de cubetas gira hasta la posición de la estación de lavado de cubetas. Las cubetas de semi-permanentes se lavan y se preparan para otro ensayo. Carga de cubetas: siempre que se descarga una cubeta, el cargador de cubetas carga una nueva cubeta en la parte exterior del rotor de cubetas de modo que haya cubetas disponibles para posteriores ensayos. Seleccione siguiente para continuar.   En las mediciones fotométricas y turbidimétricas, el reactivo y la muestra se añaden a una cubeta para producir una sustancia que absorbe o dispersa la luz a una longitud de onda específica. Después de un período de incubación determinado, el fotómetro mide la absorbancia resultante y convierte estas mediciones en resultados del informe. El sistema Dimension Vista® utiliza principios fotométricos y turbidimétricos para procesar un amplio menú de ensayos de rutina, como las incluidas en los perfiles de química clínica (por ejemplo, GLU, BUN, y CREA). La fotometría es también la base para la realización de pruebas especiales de química clínica, tales como los fármacos y drogas de abuso. ¿Cuál es la diferencia entre turbidimetría y nefelometría? Turbidimetría y Nefelometría Conozca la diferencia entre turbidimetría y nefelometría. Tab TitleTextTurbidimetríaEn ensayos turbidimétricos, un fotómetro se utiliza para medir la reducción de la transmisión de la luz a través de una solución o suspensión debido a la formación de partículas. Los ensayos turbidimétricos son ideales para medir soluciones muy turbias que contienen muchas partículas o partículas que son grandes en comparación con la longitud de onda de la luz visible.  NefelometríaEn los ensayos nefelométricos, se utiliza un nefelómetro para medir la cantidad de luz dispersada hacia un detector que producen las partículas en la solución; la luz dispersada está por lo general en ángulo recto con el detector. Los ensayos nefelométricos son ideales para medir soluciones relativamente claras, donde la luz es sólo débilmente esparcidos a causa de una baja concentración de partículas o la presencia de partículas que son muy pequeñas comparadas con la longitud de onda de la luz incidente. Cuando termine, seleccione la X en la esquina superior derecha para cerrar la ventana y continuar. Vamos a ver dentro del sistema Dimension Vista® cómo el instrumento procesos ensayos fotométricos, desde la dispensación de reactivos hasta la obtención de resultados. En la presentación de diapositivas "laboratorio virtual", usted aprenderá los pasos que tienen lugar durante las pruebas fotométricas: Dispensación de reactivo y muestra en las cubetas. Alineación de las cubetas en el fotómetro. Lecturas fotométricas. Reutilización de las cubetas semi-permanentes. Componentes principales de las mediciones fotométricas Más información sobre los componentes principales que participan en las mediciones fotométricas. Slide NumberText BlocksCalloutsAudio ScriptImage File1Bienvenido al laboratorio de química clínica virtual. El fotómetro es el sistema de detección para los ensayos colorimétricos y turbidimétricos que mide y registra las lecturas de absorbancia leídas. El fotómetro se encuentra en el área de medida de los ensayos del sistema Dimension Vista. Sólo verá esta zona del instrumento en nuestro laboratorio virtual. Veamos el interior. Seleccione Siguiente para continuar.Seleccione el número para revisar el texto correspondiente.Nota: Si el audio no se inicia automáticamente, seleccione la flecha play en la parte superior izquierda para comenzar.CalloutsÁrea de medición de los ensayosEl fotómetro es el sistema de detección para los ensayos colorimétricos y turbidimétricos que mide y registra las lecturas de absorbancia leídas. El fotómetro se encuentra en el área de medida de los ensayo del sistema Dimensión Vista®. Sólo verá esta zona del instrumento en nuestro laboratorio virtual. Veamos el interior. 2Dispensación de reactivo Una cánula de reactivo aspira reactivo desde un cartucho de reactivos Flex y lo dispensa en una cubeta. Seleccione Siguiente para continuar.Seleccione cada número para revisar el texto correspondiente.CalloutsCubetaCánula de reactivoUna cánula de reactivo aspira reactivo desde un cartucho de reactivos Flex y lo dispensa en una cubeta.3Dispensación de las muestras El rotor de cubetas gira y coloca la cubeta cerca de la bandeja de alícuotas. Seleccione Siguiente para continuar.Seleccione cada número para revisar el texto correspondiente.CalloutsBandeja de alícuotasRotor de cubetas El rotor de cubetas gira y coloca la cubeta cerca de la bandeja de alícuotas.4Dispensación de las muestras La cánula de muestra 1, dispensa la muestra desde una bandeja de alícuota en la cubeta, donde se mezcla con el reactivo. Seleccione Siguiente para continuar.Seleccione el número de revisar el texto correspondiente.CalloutsCánula de muestra 1La cánula de muestra 1, dispensa la muestra desde una bandeja de alícuota en la cubeta, donde se mezcla con el reactivo.5Incubación del contenido de las cubetas El reactivo más la muestra en la cubeta se incuban y se produce la reacción química. Seleccione Siguiente para continuar.El reactivo más la muestra en la cubeta se incuban y se produce la reacción química.6Medición de la intensidad de la luz Después de la incubación, el rotor de cubetas gira hasta el fotómetro. Seleccione Siguiente para continuar.Después de la incubación, el rotor de cubetas gira hasta el fotómetro. . 7Medición de la intensidad de la luz El centro de las cubetas se alinea con el centro de cada canal de longitud de onda, se envía una señal al fotómetro, que desencadena que la lámpara de xenón genere un destello a todos los doce canales simultáneamente De esta manera, el fotómetro proporciona una lectura dinámica cuándo las cubetas han pasado por delante del canal . Echemos un vistazo a las cubetas. Seleccione Siguiente para continuar.Slide QuestionAnswer Text¿Sabía?Que el haz de luz emitido por la lámpara de xenón parpadea durante aproximadamente 1μS para centrar la cubeta en el centro de la ventana óptica.Seleccione cada número para revisar el texto correspondiente.CalloutsFotómetroCanalesEl centro de las cubetas se alinea con el centro de cada canal de longitud de onda, se envía una señal al fotómetro, que desencadena que la lámpara de xenón genere un destello a todos los doce canales simultáneamente , esto desencadena un destello de la lámpara de xenón a los doce canales simultáneamente! De esta manera, el fotómetro proporciona una lectura dinámica cuándo las cubetas pasan por delante del canal.. 8Medición de la intensidad de la luz Las superficies claras y paralelas de las cubetas brindan un camino sin obstáculos para que el haz de luz transmita la luz a través de la solución. Además el rotor cubetas se coloca de modo que cada cubeta se alinea con la trayectoria de la señal de cada detector. Seleccione siguiente para continuar.Seleccione cada número para revisar el texto correspondiente.CalloutsCubeta Rotor de cubetasHaz de luzLas superficies claras y paralelas sobre las cubetas brindan un camino sin obstáculos para que el haz de luz transmita la luz a través de la solución. Además, el rotor de cubetas se coloca de modo que cada cubeta se alinea con la trayectoria de la señal de cada detector. 9Medición de la intensidad de la luz El rotor de cubetas gira continuamente. En cada rotación, el fotómetro registra una lectura por cubeta para cada longitud de onda medida. Las longitudes de onda específicas de medición y el número de mediciones registradas dependen del método de ensayo. Seleccione siguiente para continuar.Slide QuestionAnswer Text¿Sabía?Que el rotor contiene 184 cubetas 184 y gira cada 3,6 segundos.Seleccione cada número para revisar el texto correspondiente.CalloutsRotor de cubetasFotómetroEl rotor de cubetas gira continuamente. En cada rotación, el fotómetro registra una lectura por cubeta para cada longitud de onda medida. Las longitudes de onda específicas de medición y el número de mediciones registradas dependen del método de ensayo.10Medición de la intensidad de la luz Vamos a revisar los componentes principales del fotómetro: Fuente de alimentación de la lámpara de destello,:proporciona una fuente de energía de alto voltaje que energiza la mezcla de gas de xenón en la lámpara de destello. Lámpara de destello del xenón: proporciona la fuente de luz para el fotómetro. Haz de fibra óptica: distribuye la luz a cada uno de los doce canales ópticos. Fotómetro: contiene los filtros de longitud de onda, lentes, un divisor de haz y detectores para medir las lecturas de intensidad de luz para cada canal óptico. Seleccione siguiente para continuar.Seleccione cada número para revisar el texto correspondiente.CalloutsLámpara de destello, fuente de alimentación.Lámpara de destello de xenónHaz de fibra óptica. FotómetroRevisemos los componentes principales del fotómetro: : The flash lamp power supply provides a high voltage power source that energizes the xenon gas mixture in the flash lamp. La lámpara de destello de xenón proporciona la fuente de luz al fotómetro . El haz de fibras ópticas distribuye la luz a cada uno de los doce canales ópticos. El fotómetro consta de filtros de longitud de onda, lentes, haz divisor y detectores para medir las lecturas de intensidad de luz para cada canal óptico 11Reutilización de cubetas Después de que el ensayo fotométrico se complete: La cubeta se rechaza o reutiliza. El rotor de cubetas gira a la estación de lavado de cubetas. Las cubetas semi-permanentes se lavan y se preparan para otro ensayo. Seleccione siguiente para continuar.Seleccione el número de revisar el texto correspondiente.CalloutsEstación de lavado de las cubetasCuando se completa el ensayo fotométrico, la cubeta se descarta o re-utiliza, el rotor de cubetas gira a la estación de lavado de cubetas, donde se lavan y se prepara para otro ensayo si es una cubeta semi-permanente.12Cargando cubetas Si se descarta una cubeta, el cargador de cubeta carga una nueva cubeta en la parte exterior del rotor de cubetas para que estén disponibles para procesar los ensayos. Seleccione siguiente para continuar.Slide QuestionAnswer Text¿Sabía?Que el cargador de cubetas puede cargar cubetas nuevas mientras que el sistema Dimension Vista está procesando.Seleccione cada número para revisar el texto correspondiente.CalloutsCubetaCargador de cubetasRotor de cubetasSi se rechaza una cubeta, el cargador de cubetas, carga una nueva cubeta en el rotor de cubetas para que estén disponibles y procesar los ensayos. 13Acaba de aprender cómo los ensayos fotométricos se realiza en el sistema Dimension Vista:   Dispensación de reactivo y muestra en las cubetas. Alineación de las cubetas en el fotómetro. Obtención de las lecturas fotométricas. Reutilización de las cubetas semi-permanentes Cuando haya finalizado, seleccione la X en la esquina superior derecha para cerrar la ventana y continuar. ¡ Felicidades! Acaba de aprender cómo los ensayos fotométricos se realizan en el Sistema Dimension Vista® . Proceso fotométrico en el Vista Vea todo el ensayo fotométrico completo de principio a fin.   Si el video no se inicia automáticamente, seleccione la flecha play para comenzar. ¿Puede identificar lo que está sucediendo en todo el proceso? Cuando termine, seleccione la X en la esquina superior derecha para cerrar la ventana y continuar. El Sistema Dimension Vista® utiliza métodos fotométricos y turbidimétricos "tradicionales" para procesar pruebas (ensayos) de química clínica de rutina, así como técnicas altamente sensibles para procesar las pruebas especiales de química clínica. El método utilizado depende de las propiedades del analito que debe ser medido.     Métodos de ensayo fotométrico Aprender más acerca de los métodos de ensayo fotométrico. Base ImageHotspotsText BlocksImage FilePETINIA Los ensayos PETINIA (Particle-Enhanced turbidimetry InhibitionImmunoassay) comúnmente usados para realizar el seguimiento de los niveles de fármacos terapéuticos. El ensayo se basa en la competencia entre: El analito presente en la muestra, y el analito en el reactivo unido a las partículas sintéticas. Ambas fuentes de analito compiten por los sitios de unión del anticuerpo monoclonal específico del analito en el reactivo, que disminuye la velocidad de agregación. La velocidad de agregación es inversamente proporcional a la concentración de analito en la muestra y se mide utilizando una rate turbidimétrico a 340 nm y 700 nm. Ejemplos de ensayos PETINIA del sistema Dimension Vista® son: los ensayos de seguimiento de drogas terapéuticas (TDM), como la teofilina (Theo) y tobramicina (TOBR). EMIT® Los ensayos EMIT® se usan comúnmente para detectar la presencia de drogas de abuso. El ensayo se basa en la competencia entre: El analito presente en la muestra, y Analito marcado con la enzima deshidrogenasa de glucosa-6-fosfato (G6P-DH).en reactivo. Ambas fuentes de analito compiten por los sitios de unión del anticuerpo específico del analito en el reactivo. La cantidad de enzima libre convierte la oxidized nicotinamide adenine dinucleotide (NAD) a NADH, que da un color. La intensidad del cambio de color es proporcional a la concentración de analito en la muestra y se mide fotométricamente a 340 nm. Ejemplos de ensayosEMIT en el sistema Dimension Vista® ® son las drogas de abuso, como los barbitúricos y etanol. Colorimetría En los ensayos colorimétricos, el reactivo reacciona con una cantidad desconocida de analito en una muestra para producir un color. El fotómetro mide la cantidad de luz absorbida por la solución de color a una longitud de onda específica. La cantidad de luz absorbida es directamente proporcional a la concentración de analito en la muestra. Ejemplos de ensayos colorimétricos del sistema Dimension Vista® son: GLU, CA, BUN, y otras pruebas de rutina como en los perfiles de química clínica. El ensayo ACMIA implica los siguientes pasos: El analito presente en la muestra se incuba con el reactivo que contiene un exceso de anticuerpo monovalente marcado con un enzima para el analito que se mide para asegurarse de que todo el analito se une. Partículas magnéticas recubiertas con un analito análogo se añaden para unirse al anticuerpo-enzima conjugado (libre). La mezcla se separa magnéticamente. Después de la separación, el sobrenadante que contiene el complejo analito-anticuerpo-enzima se transfiere a una cubeta y se mezcla con un sustrato. El anticuerpo monovalente marcado con enzima que se une al analito en la muestra se mide a continuación, utilizando una técnica bicromática (405 nm y 510 nm). La parte de enzima del complejo anticuerpo-enzima cataliza la hidrólisis del sustrato causando un cambio en la absorbancia a 577nm. El cambio en la absorbancia a 577 nm es directamente proporcional a la actividad enzimática y se mide usando una la técnica rate a longitud bicromática (577, 700 nm). Ejemplos de ensayos ACMIA en el sistema Dimension Vista® son: digoxina (DIG), digitoxina (DGTX), ciclosporina (CSA) y triyodotironina (T3).   El fotómetro del sistema Dimension Vista® ofrece diez canales fotométricos y dos turbidimétricos que guían la luz hacia detectores individuales. Aquí se muestran los datos ópticos de un solo canal. El análisis se inicias, cuando una muestra que contiene una cantidad desconocida de analito a determinar, se mezcla con el reactivo. y se produce una reacción química.   Fotómetro del Dimension Vista®. Aprende más sobre el fotómetro del sistema Dimension Vista®. Base ImageHotspotsText BlocksImage File Lámpara de destello de xenón proporciona la fuente de luz para el fotómetro. Al girar la rueda de cubetas, la lámpara de flash emite un haz de luz cuando el centro de una cubeta está alineado con el centro de un canal de fibra óptica. El destello de luz se emite simultáneamente en todos los doce canales.La fuente de alimentación de la lámpara de flash proporciona una fuente de alimentación de alto voltaje para dar energía a la mezcla de gas xenón a la lámpara de flash.El haz de fibra óptica proporciona 12 canales que guían la luz a los detectores individuales. En las mediciones fotométricas se utilizan diez canales, y dos canales en las mediciones turbidimétricas.El detector de referencia realiza el seguimiento del a intensidad de la luz como una función del tiempo y longitud de onda.El filtro de longitud de onda reduce el haz de luz para aislar una longitud de onda específica para cada canal. Los canales fotométricos miden la luz a 293nm 340nm, 383nm, 405 nm, 452nm, 510nm, 540nm, 577nm, 600 nm y 700nm. Los canales turbidimétricos miden la luz a 340nm y 700nm.Las lentes enfocan el haz de luz dirigida hacia la cubeta. El divisor de haz dirige el 10% del haz de luz hacia un detector de referencia y el restante 90% a la cubeta.Para los ensayos fotométricos y turbidimétricos, la reacción se lleva a cabo en cubetas semi-permanentes. A medida que el haz de luz pasa a través de la cubeta, los reactantes de la muestra absorben parte de la luz y el resto se transmite.En cada giro del rotor de cubeta, el detector mide la intensidad de entrada de luz y genera una señal eléctrica. Las lecturas se convierten electrónicamente en señales digitales y se envían al ordenador central para el cálculo y análisis. Dependiendo del método de ensayo, la relación entre la intensidad de la luz entrante y la concentración de analito en la muestra puede ser lineal o no lineal.