Dimensión Vista® - Principios LOCI® -Curso online

Seleccione siguiente para continuar. Definir los conceptos de inmunoensayos competitivos, no competitivos y homogéneos Describir cómo la tecnología LOCI® detecta los inmunocomplejos Describir el proceso de las técnicas LOCI ® y señalar el área del Sistema Dimension Vista® donde se produce la medición de los ensayos Bienvenido al curso de capacitación en línea LOCI®. Después de completar este curso, usted podrá: ¡Felicidades!. Ha finalizado el curso de capacitación en línea LOCI®. En este curso, ha aprendido cómo el sistema Dimension Vista® realiza las técnicas LOCI®. Este es un breve resumen: Definición de los conceptos de inmunoensayo homogéneo, inmunoensayo no competitivo e inmunoensayo competitivo La tecnología LOCI® permite que el sistema Dimension Vista® realice inmunoensayos homogéneos competitivos y no competitivos. En un inmunoensayo no competitivo, el antígeno presente en la muestra se une a los receptores de dos anticuerpos monoclonales diferentes. En los inmunocomplejos que se forman, ambos anticuerpos flanquean el antígeno (y de ahí que este tipo de ensayo reciba el nombre también de tipo “sándwich”). En un inmunoensayo competitivo, el antígeno presente en la muestra se une a anticuerpo monoclonal biotinilado. Como consecuencia, se forman inmunocomplejos. A continuación, los reactivos se incuban con partículas sintéticas recubiertas con un análogo del antígeno, que compiten con el antígeno contenido en la muestra por los sitios de unión “libres” del anticuerpo monoclonal biotinilado. Un inmunoensayo homogéneo no exige separar antes de la medición los inmunocomplejos de los reactivos no unidos a antígeno que puedan quedar en la muestra. Este tipo de inmunoensayo generalmente es mucho más sencillo y rápido que un inmunoensayo heterogéneo, que sí exige un paso de lavado previo a la medición y cuyo objetivo es separar los inmunocomplejos de los reactivos no unidos al antígeno que pueda quedar en la muestra. Descripción del modo en que la tecnología LOCI® detecta los inmunocomplejos La tecnología de quimioluminiscencia avanzada LOCI® constituye un avance extraordinario en el campo de la inmunoquímica ya que combina un inmunoensayo extremadamente sensible con un innovador método de detección patentado. Los reactivos principales, representados en la figura adjunta, se describen a continuación.   Chemibead: las partículas Chemibead (1) están recubiertas de anticuerpos monoclonales (2) específicos del analito (3) que se está analizando. El analito actúa como antígeno en la reacción. Las partículas Chemibead también están recubiertas de una sustancia que genera quimioluminiscencia cuando están muy cerca del singulete de oxígeno. Anticuerpo biotinilado: los inmunoensayos LOCI® no competitivos emplean un segundo anticuerpo monoclonal (4) específico del analito que se está analizando. La biotina (5) está unido a este anticuerpo "biotinilado". Durante la incubación a 37 ° C, se forman inmnocomplejos Ac + Ag + Ac, donde el antígeno está "flanqueado" por los anticuerpos monoclonales. En el laboratorio, la biotina se utiliza para establecer puentes físicos entre complejos con la ayuda de otra sustancia denominada estreptavidina (6). Estreptavidina: la estreptavidina tiene una propiedad exclusiva: se une rápidamente a la biotina del anticuerpo biotinilado para formar inmunocomplejos compuestos por un par de partículas esféricas, es decir, por una partícula Chemibead y una partícula Sensibead (7). Sensibead: las partículas Sensibead están recubiertas de estreptavidina y de un pigmento fotosensible. Cuando una luz con una longitud de onda de 680 nm incide sobre las partículas Sensibead, éstas generan singuletes de oxígeno, que se difunden a las partículas Chemibead y provoca una reacción quimioluminiscente. El lector LOCI® mide la intensidad de esa quimioluminiscencia a 612 nm. La señal es proporcional a la concentración de analito en la muestra analizada. Descripción del procesado de las técnicas LOCI® e identificación del área del sistema Dimension Vista® en donde se produce la medición de las pruebas Algunos ejemplos de técnicas LOCI® son: CTnI, MMB, MYO, NT proBNP, FT3 y FT4. En el caso de las técnicas LOCI® que utilizan un tipo de inmunoensayo no competitivo, el sistema Dimension Vista® realiza las tareas siguientes: Las reacciones LOCI® tienen lugar en cubiletes de reacción. El rotor de cubetas gira para trasladar el cubilete hasta una cánula de reactivos, a continuación, se dispensa el reactivo de un cartucho de reactivos Flex® en el cubilete. El rotor de cubetas gira de nuevo para desplazar el cubilete hasta la cánula de muestras que, a continuación, dispensa un volumen de muestra máximo de 20 µL de un pocillo de la bandeja de alícuotas en el cubilete. Una vez finalizado el periodo de incubación, el rotor de cubetas gira una vez más para desplazar el cubilete hasta el Lector LOCI®. Tras un periodo de incubación final, el lector LOCI® utiliza una fuente de luz de LED para hacer incidir una luz de 680 nm sobre la solución de reacción, lo que provoca que las partículas Sensibead liberen singuletes de oxígeno. A continuación, las partículas Chemibead cercanas al singulete de oxígeno generan quimioluminiscencia. El lector LOCI® ejecuta entonces dos acciones de forma alterna: primero hace incidir una luz de 680 nm sobre los reactivos para provocar la liberación de singuletes de oxígeno y, a continuación, lee la señal de quimioluminiscencia generada a 612 nm. El lector LOCI® completa un número máximo de cuatro ciclos de iluminación/lectura; este número varía en función de la técnica empleada. Este proceso no requiere un paso de lavado o separación previo a la medición destinada a eliminar los reactivos no unidos al antígeno que puedan quedar en la muestra. La señal medida es proporcional a la concentración de analito en la muestra analizada. Seleccione Siguiente para continuar.   La tecnología LOCI® permite que el sistema Dimension Vista® realice inmunoensayos homogéneos competitivos y no competitivos. En el módulo de formación Nefelometría, se describieron algunas nociones básicas de los inmunoensayos realizados en el laboratorio clínico. Este es un breve resumen: Gracias a su propiedad exclusiva de reconocer y distinguir antígenos afines, los anticuerpos se utilizan como reactivos para la determinación de la presencia y la cantidad de determinados analitos en los fluidos corporales. Durante la realización de un inmunoensayo, el analito a determinar, normalmente, actúa como antígeno específico del anticuerpo del reactivo y se une a éste para formar inmunocomplejos. En función del método de detección empleado, la concentración del analito es directa o inversamente proporcional a la concentración de los inmunocomplejos formados.   Revisión de Inmunología II Aprenda más sobre las técnicas utilizadas por los diferentes métodos de ensayo LOCI®. ¿Qué técnicas LOCI® utilizan un inmunoensayo homogéneo no competitivo y qué métodos utilizan un inmunoensayo homogéneo competitivo?   Inmunoensayos no competitivos inmunoensayos competitivos CTnI MMB MIO NT-proBNP FT3 FT4 Cuando haya finalizado, seleccione la X en la esquina superior derecha para cerrar la ventana y continuar. Revisión Inmunología tipos de inmunoensayos Aprenda más sobre los inmunoensayos homogéneos competitivos y no competitivos. Checklist TitleChecklist TypeChecklist ContentRevisión Inmunología tipos de inmunoensayosHTMLSeleccione cada casilla para aprender más acerca de los inmunoensayos. ¿Qué es un inmunoensayo no competitivo ("sandwich")?HTML  En un inmunoensayo no competitivo: El analito presente en la muestra actúa como antígeno y se incuba con dos reactivos; cada uno de estos reactivos contiene un anticuerpo monoclonal diferente. En este ejemplo concreto, uno de los anticuerpos monoclonales está libre y el otro está unido a una partícula sintética. Cada anticuerpo monoclonal tiene receptores para una región específica del antígeno; en otras palabras, los anticuerpos monoclonales son diferentes no compiten por los mismos sitios de unión del antígeno. Durante la reacción el antìgeno se une a los receptores de ambos anticuerpos. En los inmunocomplejos que se forman, los anicuerpos flanquean al antigeno ("sandwich"). En este ejemplo, la cantidad de antígeno en la muestra es directamente proporcional a la concentración de inmunocomplejos sintéticos unidos que se forman. Leyenda: 1. Anticuerpo monoclonal libre 2. Antígeno (analito de la muestra) 3. Anticuerpo monoclonal unido a la partícula sintética¿Qué es un inmunoensayo competitivo?HTML  En un inmunoensayo competitivo: El analito presente en la muestra actúa como antígeno y se incuba con el reactivo que contiene anticuerpo monoclonal biotinilado. Durante la reacción, el antígeno se une a los receptores del anticuerpo para formar inmunocomplejos. Los reactivos también se incuban con partículas sintéticas recubiertas con un análogo del antígeno, que compiten con el antígeno de la muestra por los sitios de "unión" libres del anticuerpo monoclonal biotinilado. En este ejemplo, la cantidad de antígeno en la muestra es indirectamente proporcional a la concentración de inmunocomplejos sintéticos unidos que se forman. Leyenda 1. Anticuerpo monoclonal biotinilado 2. Antígeno (analito de la muestra) 3. Partículas sintéticas recubiertas de análogo del antígenoInmunoensayos heterogéneos y homogéneosHTML  Un Inmunoensayos heterogéneos requieren una etapa de lavado antes de la medición para separar los inmunocomplejos de los reactivos no unidos a antígeno que puedan quedar en la muestra. Después del lavado, únicamente permanecen en la muestra los reactivos unidos a antígeno, tal como refleja este ejemplo. Los Inmunoensayos homogéneos -como LOCI® no requieren la separación de inmunocomplejos a partir de reactivos no unidos antes de que se midan los inmunocomcomplejos.. Estos inmunoensayos son generalmente mucho más fáciles y rápidos de realizar. Leyenda: 1. Anticuerpo monoclonal libre 2. Antígeno (analito de la muestra) 3. Anticuerpo monoclonal unido a una partícula sintética 4. Reactivo no unido a antígeno eliminado durante la etapa de lavado Cuando haya finalizado, seleccione la X en la esquina superior derecha para cerrar la ventana y continuar. Ahora que ya puede visualizar lo que ocurre durante los inmunoensayos homogéneos competitivos y no competitivos, veamos cómo la tecnología de quimioluminiscencia avanzada LOCI® detecta los inmunocomplejos.   ¿En qué consiste el método de detección de LOCI® ? Aprenda cómo la tecnología LOCI® detecta los inmunocomplejos para la determinación de analitos. Checklist TitleChecklist TypeChecklist Content¿En qué consiste es el método de detección LOCI ®?HTMLSeleccione cada una de las casilla para aprender más acerca de los componentes de la tecnología LOCI®. Reactivos principales del LOCI®HTML La tecnología de quimioluminiscencia avanzada LOCI ® utiliza los reactivos representados en la figura. Haga clic en cada casilla de la izquierda para conocer la función de cada uno de los componentes que intervienen en el inmunoensayo. Leyenda 1. Chemibead 2. Anticuerpo monoclonal 3. Antígeno (sustancia analizada en la muestra) 4. Anticuerpo biotinilado 5. Biotina 6. Estreptavidina 7. SensibeadChemibeadsHTML Los inmunoensayos no competitivos (sandwich) emplean particular Chemibead sintéticas específicas de cada método, que están recubiertas de anticuerpors monoclonales específicos del analito que se está analizando. Leyenda 1. Chemibead 2. Anticuerpo monoclonalAnticuerpos biotiniladosHTML  Los reactivos empleados en el inmunoensayo incluyen también el analito que se está analizando, que actúa como el antígeno (Ag), así como un segundo anticuerpo monoclonal (Ab) específico del analito en cuestión. Este anticuerpo se une a Biotina y se convierte en un anticuerp biotinilado. Durante el periodo de incubación a 37 ° C, se forman los inmunocomplejos Ac + Ag + Ac, donde el antígeno está "intercalado" entre los anticuerpos monoclonales. Leyenda 1. Chemibead 2. Anticuerpo monoclonal 3. Antígeno (sustancia analizada en la muestra) 4. Anticuerpo biotinilado 5. BiotinaSensibeads + estreptavidinaHTML  Los reactivos del inmunoensayo incluyen también Sensibeads recubiertas con estreptavidina. Las partículas Sensibeads contienen un pigmento fotosensible. La Estreptavidina es una proteína pequeña con propiedades bioquímicas únicas, tales como su alta afinidad para unirse a la biotina. Cuando se añade a la prueba, la Estreptavidina rápidamente se une a la porción de biotina del anticuerpo biotinilado para formar inmunocomplejos compuestos por dos partículas esféricas. Leyenda 1. Chemibead 2. Anticuerpo monoclonal 3. Antígeno (sustancia analizada en la muestra) 4. Anticuerpo biotinilado 5. Biotina 6. Estreptavidina 7. SensibeadGeneración de quimioluminiscenciaHTML  Cuando una luz con una longitud de onda de 680 nm incide sobre las partículas Sensibeads, estas generar un singulete de oxígeno, que se difunde a las partículas Chemibeads cercanas y desencadena una reacción de quimioluminiscencia. La señal resultante se mide a 612 nm y es proporcional a la concentración de analito que se está determinando. Leyenda 1. Fuente de luz LED 2. Singulete de oxígeno liberado por las partículas Sensibead 3. Quimioluminiscencia generada por las partículas Chemibead Cuando haya finalizado, seleccione la X en la esquina superior derecha para cerrar la ventana y continuar. Ahora que ya entiende de qué forma la tecnología LOCI® detecta los inmunocomplejos, adentrémonos en el sistema Dimension Vista® para estudiar detenidamente el proceso de una muestra para la que se ha solicitado una prueba LOCI®; esta visita sólo es posible en el laboratorio virtual. Determinaciones LOCI® en el sistema Dimension Vista® Más información sobre las determinaciones LOCI® en el sistema Dimension Vista® Slide NumberText BlocksCalloutsAudio ScriptImage File1Bienvenido al Laboratorio virtual. Veamos a continuación, como las técnicas LOCI® son procesadas y dónde se produce la medición de las muestras en el sistema Dimension Vista®. Seleccione Siguiente para continuar.Nota: Si el audio no se inicia automáticamente, seleccione la flecha de play en la parte superior izquierda para comenzar.Bienvenidos al Laboratorio Virtual! Veamos a continuación, el proceso de las técnicas LOCI® y dónde se produce la medición de las pruebas en el sistema Dimension Vista®. 2Introducción Las técnicas LOCI® emplean los cubiletes de reacción desechables. Seleccione Siguiente para continuar.Las técnicas LOCI ® emplean los cubiletes de reacción desechables.3Pipeteado de reactivo La cánula de reactivo dispensa reactivo de un cartucho de reactivo Flex® en el cubilete de reacción, situado en el rotor de cubetas. El rotor de cubetas tiene capacidad para albergar un máximo de 94 cubiletes de reacción. Seleccione Siguiente para continuar.Seleccione cada número para revisar el texto correspondiente.Nota: Si el audio no se inicia automáticamente, seleccione la flecha de play en la parte superior izquierda para comenzar.CalloutsCánula de reactivos Cubilete de reacción Rotor de cubetasPara empezar, la cánula de reactivo dispensa reactivo de un cartucho de reactivo Flex ® en el cubilete de reacción, situado en el rotor de cubetas. El rotor de cubetas tiene capacidad para albergar un máximo de 94 cubiletes de reacción. 4Translado del cubilete de reacción El rotor de cubetas gira para colocar el cubilete de reacción en una posición próxima a la bandeja de alícuotas. Seleccione Siguiente para continuar.Seleccione cada número para revisar el texto correspondiente.CalloutsRotor de cubetasBandeja de alícuotasA continuación, el rotor de cubetas gira para colocar el cubilete de reacción en una posición próxima a la bandeja de alícuotas.5Pipeteado de la muestra La cánula de muestra 1 dispensa muestra desde el pocillo de la bandeja de alícuotas en un cubilete de reacción. La simplicidad del tipo de inmunoensayo homogéneo hace que este tipo de ensayos requieran menos volume de muestra - hasta un volume máximo de sólo 20 µL. Seleccione Siguiente para continuar.Seleccione cada número para revisar el texto correspondiente.CalloutsCánula de muestras 1Bandeja de alícuotasLa cánula de muestra 1 dispensa muestra desde el pocillo de la bandeja de alícuotas en un cubilete de reacción. La simplicidad del tipo de inmunoensayo homogéneo hace que este tipo de ensayos requieran menos volume de muestra - hasta un volumen máximo de sólo 20 µL. 6Frmación de inmunocomplejos Los inmunocomplejos se forman a medida que el analito en la muestra reacciona simultáneamente con un anticuerpo monoclonal unido a partículas Chemibeads, y con el anticuerpo monoclonal biotinilado "libre". Leyenda Chemibead Anticuerpo monoclonal Antígeno (sustancia analizada en la muestra) Anticuerpo biotinilado Biotina Nota: No todas las partículas Chemibeads están unidas a anticuerpos. Seleccione Siguiente para continuar.Slide QuestionAnswer Text¿Que sucede en un cubilete de reacción durante este periodo de incubación?El antígeno (analito) queda flanqueado por dos anticuerpos monoclonales; este es un ejemplo de un inmunoensayo no competitivo. Los inmunocomplejos se forman a medida que el analito en la muestra reacciona simultáneamente con un anticuerpo monoclonal unido a partículas Chemibeads, y con el anticuerpo monoclonal biotinilado "libre".7Formación de inmunocomplejos compuestos por un par de partículas esféricas Una vez finalizado el período de incubación inicial, se añaden partículas Sensibeads recubiertas con Estreptavidina al cubilete de reacción. La Estreptavidina se une rápidamente a la porción de biotina del anticuerpo biotinilado para formar inmunocomplejos compuestos por una par de esferas. Leyenda Chemibead Anticuerpo monoclonal Antígeno (sustancia analizada en la muestra) Anticuerpo biotinilado Biotina Estreptavidina Sensibead Seleccione Siguiente para continuar,Una vez finalizado el período de incubación inicial, se añaden partículas Sensibeads recubiertas con estreptavidina al cubilete de reacción. La estreptavidina se une rápidamente a la porción de biotina del anticuerpo biotinilado para formar inmunocomplejos compuestos por una par de esferas. 8Casi ya está Ahora el cubilete de reacción contiene todos los reactivos LOCI®. En este momento el rotor de cubetas gira para desplazar el cubilete de reacción hasta el lector LOCI®. Seleccione la flecha para comenzar el video. Seleccione Siguiente para continuar.CalloutsLector LOCI ® Ahora el cubilete de reacción contiene todos los reactivos LOCI®, en este momento el rotor de cubetas gira para desplazar el cubilete de reacción hasta el lector LOCI®.9Liberación de un singulete de oxígeno Tras un periodo de incubación final, el lector LOCI® utiliza una fuente de luz de LED para hacer incidir una luz de 680 nm sobre la solución de reacción, lo que provoca que las partículas Sensibead liberen singuletes de oxígeno. Este proceso no require un paso de lavado o separación previo a la medición, destinado a eliminar los reactivos no unidos al antígeno que pudieran quedar en la muestra. Leyenda Fuente de luz LED Singulete de oxígeno liberado por las partículas Sensibead Seleccione Siguiente para continuar.Tras una incubación final, el lector LOCI® utiliza una fuente de luz LED para hacer incidir una luz de 680 nm sobre la soluciión de la reacción, lo que provoca que las partículas Sensibead liberen un singulete de oxígeno. Este proceso no require un paso de lavado o separación previo a la medición, destinado a eliminar los reactivos no unidos al antígeno que pudieran quedar en la muestra. 10Generación de quimioluminiscencia Las partículas de Chemibead reaccionan con un singulete de oxígeno y generan quimioluminiscencia a 612 nm; el lector LOCI ® mide la luz a esta longitud de onda, también. Leyenda Fuente de luz LED Singulete de oxígeno liberado por las partículas Sensibead Quimioluminiscencia generada a partir de las partículas Chemibead Seleccione Siguiente para continuar.Slide QuestionAnswer Text¿Por qué no es necesario incluir una fase de lavado y ni eliminar el reactivo no unido a antígeno de la muestra antes de la medición?La quimioluminiscencia se genera sólo si ambas partículas Sensibead y Chemibeads están muy próximas entre sí, como es el caso de la formación de inmunocomplejos compuestos por un par de partículas esféricas. Por lo tanto, el reactivo no unido al antigeno no afecta a la cantidad de quimioluminiscencia medida.Las partículas de Chemibead reaccionan con un singulete de oxígeno y generan quimioluminiscencia a 612 nm; el lector LOCI ® mide la luz a esta longitud de onda, también.11Generación de resultados Los componentes principales del lector LOCI ® incluyen un diodo emisor de luz (LED), que emite luz, y un fotomultiplicador de canal (CPM), que mide la luz emitida. Para determinar el resultado final, el lector LOCI® alterna las siguientes acciones: Hacer incidir sobre los reactivos un luz a 680 nm para liberar un singulete de oxígeno Lectura de la señal quimioluminiscente generada a 612 nm El lector complete un número máximo de cuatro ciclos de iluminación/lectura; este número varía en función de la técnica empleada. Una vez finalizado la prueba, se desecha el cubilete de reacción. Seleccione Siguiente para continuar.Seleccione cada número para revisar el texto correspondiente. CalloutsLEDFotomultiplicador de canal (CPM)Los componentes principales del lector LOCI ® incluyen un diodo emisor de luz (LED), que emite luz, y un fotomultiplicador de canal (CPM), que mide la luz emitida. Para determinar el resultado final, el lector LOCI® alterna entre hacer incidir sobre los reactivos un luz a 680 nm para liberar un singulete de oxígeno y leer la señal de quimioluminiscente generada a 612 nm. Una vez finalizado la prueba, se desecha el cubilete de reacción. 12Ya conoce el proceso de las técnicas LOCI® y el área del sistema Dimension Vista® donde se produce la medición de las pruebas.Cuando haya finalizado, seleccione la X en la esquina superior derecha para cerrar la ventana y continuar. Felicidades Ya conoce el proceso de las técnicas LOCI® y el area del sistema Dimension Vista® donde se produce la medición de las pruebas.